睿信生物-牛溶酶體a-甘露糖苷酶-I-a-mannosidase-I-ELISA試劑盒
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生物藥物分析方法開發
分析方法驗證
高品質科研elisa試劑盒、化學發光試劑盒開發與定制
供科研使用,不得用于臨床檢驗。
泉州市睿信生物科技有限公司是集研發、生產、銷售、服務及品牌代理為一體的生物技術公司,目前可提供各種抗體、免疫學試劑盒、生化試劑、分子生物學試劑等高品質產品及服務,涵蓋分子生物學、細胞生物學、免疫學等生命科學領域。依托湖北武漢、江蘇南京、福建泉州三大研發及銷售 ,布局全國市場。
我們致力于為高等院校、研究機構、診斷試劑廠家、生物制藥公司、動物造模公司等科研單位,提供高質量檢測試劑盒、方法學開發及實驗外包服務,為客戶的科學研究提供可靠的技術支持。公司干技術人員均有10年以上的從業經驗,是值得您信賴的科研伙伴!
企業建立了完善的研發系統和生產設備,并與知名高校、研究機構、 企業等建立戰略合作關系。公司自成立以來,就非常注重企業信息化的建設,我們采用了先進的內部供應鏈信息處理平臺,保證客戶的需求可以準確、高效處理。
為每一位科研人員獻上高品質的產品及服務是我們的使命。
樣本處理:
1. 血清:將收集于血清分離管的全血標本在室溫放置2小時或4℃過夜,然后1000×g離心20 分鐘,取上清即可,或將上清置于-20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融。
2. 血漿:用EDTA或肝素作為抗凝劑采集標本,并將標本在采集后的30分鐘內于2-8℃ 1000×g離心15分鐘,取上清即可檢測,或將上清置于-20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融。
3. 組織勻漿:用預冷的PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組織,去除殘留血液(勻漿中裂解的紅細胞會影響測量結果),稱重后將組織剪碎。將剪碎的組織與對應體積的PBS(一般按1:9的重量體積比,比如1g的組織樣品對應9mL的PBS,具體體積可根據實驗需要適當調整,并做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑)加入玻璃勻漿器中,于冰上充分研磨。為了進一步裂解組織細胞,可以對勻漿液進行超聲破碎,或反復凍融。最后將勻漿液于5000×g離心5~10分鐘,取上清檢測。
注意事項:
1. 嚴格按照規定的時間和溫度進行溫育以保證準確結果。所有試劑都必須在使用前達到室溫20-25℃。使用后立即冷藏保存試劑。
2. 洗板不正確可以導致不準確的結果。在加入底物前確保盡量吸干孔內液體。溫育過程中不要讓微孔干燥掉。
3. 消除板底殘留的液體和手指印,否則影響OD值。
4. 底物顯色液應呈無色或很淺的顏色,已經變藍的底物液不能使用。
5. 避免試劑和標本的交叉污染以免造成錯誤結果。
6. 在儲存和溫育時避免強光直接照射,不能使用過期產品。
7. 平衡至室溫后再打開密封袋以防水滴凝聚在冷板條上。
8. 任何反應試劑不能接觸漂白溶劑或漂白溶劑所散發的強烈氣體。任何漂白成分都會破壞試劑盒中反應試劑的生物活性。
9. 如果可能傳播疾病,所有的樣品都應管理好,按照規定的程序處理樣品和檢測裝置。
牛溶酶體a-甘露糖苷酶-I a-mannosidase-I ELISA試劑盒
摘 要: 目的:觀察不同類型乙型病毒性肝炎患者中炎性因子的表達及組蛋白去乙酰化酶1(HDAC1)的表達,探討其在不同程度肝損傷患者中發生的意義。方法:收集臨床乙型病毒性肝炎重型、重度、輕度患者及健康人外周血標本,分離血清及單個核細胞(PBMC),用ELISA方法檢測各組血清中IL-4、TNF-α、IFN-γ的表達及PBMC中HDAC1的表達,用RT-PCR方法檢測PBMC中HDAC1 mRNA的表達。結果:IL-4、TNF-α、IFN-γ與HDAC1蛋白表達水平的相關性較高,重型組與重度組之間以及輕度組與正常人組之間的炎性因子表達及HDAC1表達差異無顯著性意義(P〉0.05),與輕度組和正常人組相比,重型組和重度組的IL-4、TNF-α、IFN-γ及HDAC1的蛋白表達以及HDAC1 mRNA的表達均升高。結論:IL-4、TNF-α、IFN-γ等相關炎癥因子與乙型病毒性肝炎的病情程度密切相關,HDAC1在炎癥因子的表達過程中可能發揮重要作用。
牛溶酶體a-甘露糖苷酶-I a-mannosidase-I ELISA試劑盒
目的研究鈣蛋白酶抑制劑 ALLN對缺血-再灌注(I-R)大鼠心肌肌漿網鈣泵(SERCA)功能的影響。方法 24只雄性SD大鼠隨機分為正常灌注組(對照組)、I-R組、ALLN+I-R組和二甲亞砜+I-R組(DMSO+I-R組),分別檢測再灌注15min 時冠狀動脈流出量(CF)和冠脈流出液中乳酸脫氫酶(LDH)漏出量;熒光分光光度計測定熒光強度來反映鈣蛋白酶活性;分別采用改良p-NPP法和 Millipore過濾技術測定SERCA的活性和ATP依賴的SERCA45Ca2+攝取率,免疫印跡法檢測心肌細胞SERCA蛋白表達水平。結果與 I-R組相比,ALLN+I-R組CF、SERCA蛋白表達水平、SERCA的活性和45Ca2+攝取率顯著增高(P0.01),而LDH漏出量和鈣蛋白 酶活性顯著降低(P0.01)。結論 ALLN對離體大鼠心臟I-R損傷有保護作用,與其抑制鈣蛋白酶活性,一定程度減輕I-R損傷對SERCA功能及蛋白表達水平的影響有關。
牛溶酶體a-甘露糖苷酶-I a-mannosidase-I ELISA試劑盒
目的:熱休克蛋白90α(HSP 90α)是細胞受應激原刺激后誘導產生的一種應激蛋白,在腫瘤組織中HSP90α表達量達正常組織表達水平的2-10倍。其在血液中的含量與腫瘤惡性程度呈正相關。HSP90α作為一種全新腫瘤標志物,用于肺癌、胃癌、肝癌、乳腺癌、結直腸癌等多個腫瘤的臨床檢測。患者血漿中HSP90α含量水平對應患者病情變化,可實時、較準確地反映治療效果,在臨床上可為醫生提供診斷、治療、預后的客觀依據。本實驗針對此蛋白進行系統研究,建立人血清中熱休克蛋白90α(HSP90α)的熒光免疫層析定量檢測方法。方法:1、采用人HSP90α融合蛋白,進行抗原純度、濃度和生物活性的鑒定,免疫小鼠、利用間接酶聯免疫吸附法(ELISA)效價鑒定、細胞融合、單克隆抗體制備、單抗純度和亞型鑒定、蛋白純化等實驗操作步驟制備純度較高的HSP90α單克隆抗體和多克隆抗體。2、研制用于定量檢測的熒光免疫層析檢測試紙條,通過采用熒光免疫層析技術,對熒光微球制備工藝進行優化,并對最佳反應時間、線性范圍、精密性、回收率、臨床檢測等性能評價方面進行系統研究。初步建立了熱休克蛋白90α熒光免疫層析檢測方法。結果:1、共篩選出16株單克隆細胞株,經過亞型篩選以后共選出8株陽性細胞株,編號分別為3B2、4E3、4F4、5E2、7D1、7E4、8F2、8G4。2、經過8株單抗和多抗配對,挑選出8F2和多抗成為最優的一對配對抗體。確定了各反應條件,最佳反應時間為5min。線性范圍0.39ng/m L-100ng/m L;靈敏度為0.0578ng/ml;精密性質控品高值(30ng/m L)CV=7.46%;低值(10ng/m L)CV=8.39%,高、中、低值血清的回收率分別為100.56%、99.76%、94.1%;與國外HSP90αELISA檢測試劑盒平行檢測40份臨床患者血清,結果顯示兩者相關系數為0.9685。結論:1、通過單克隆抗體制備的實驗過程,成功篩選出8株陽性細胞株,并挑選出一對配對抗體用于后續實驗的研究。2、超聲波技術在熒光微球活化過程中可降低聚集現象。3、初步建立的方法具有良好的精密性和線性,臨床符合率能滿足臨床檢測技術要求,有望完善后報批用于臨床。