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普利萊 CCK-8細胞增殖毒性檢測試劑盒 貨號: E1008-1000

特點：

1. 簡單快捷、即開即用，可進行大規(guī)模樣品檢測。描述：Cell Counting Kit-8(CCK-8)試劑盒基于WST-8試劑，可對細胞增殖和細胞毒性進行快速高度靈敏的檢測。與傳統(tǒng)的MTT或其他類似的方法相比，本試劑盒生成的 Formazan 是水溶性的，而且更加穩(wěn)定，其檢測的線性范圍更寬、靈敏度也更高。

2. 與其他方法相比，檢測線性范圍更寬，靈敏度更高。

3. 對細胞無明顯毒性，可在不同時間進行多次測定，便于尋找最佳測定時間。

規(guī)格：200次   500次

儲存：CCK-8試劑：2ml, 5ml，?20oC 避光保存2年，4oC 避光保存1年，反復凍融可能會增加背景值

操作步驟：

1. 使用與酶標儀相匹配的96孔培養(yǎng)板。通常進行細胞增殖實驗時，每孔加100μl 2000個細胞，而測定細胞毒性時，每孔加100μl 5000個細胞，應根據所用的細胞類型、增殖速度進行調整。注意設置2-3個重復孔，分別為接受處理的細胞組，未處理的細胞對照組和無細胞培養(yǎng)基的對照組。37oC培養(yǎng)細胞24-48小時，然后給予特定的藥物或物理化學因素刺激。

2. 處理結束后，向每孔每100 μl培養(yǎng)基中加入10μl CCK-8試劑（注意在加入的過程中不要產生氣泡，否則會影響OD值的讀取），37 oC培養(yǎng)箱內孵育1-4小時，培養(yǎng)時間的長短依據細胞種類、數量、活力等情況而定。初次實驗者，可以選擇幾個不同的培養(yǎng)時間點如1h, 2h, 4h用酶標儀進行檢測，以便選擇出適宜的吸光度范圍進行實驗。

3. 在450nm測定OD吸光度并進行計算。如無450nm濾光片可用430-490nm范圍內的濾光片。注意：若樣品為渾濁的細胞懸液時，可以選用大于600nm的波長，如650nm作為參比波長進行雙波長測定。

4. 結果判斷：細胞增殖或毒性＝100％x (OD實驗－OD本底) / (OD對照－OD本底)。

其中，OD實驗是接受處理細胞組的OD值，OD對照是未處理細胞對照組的OD值，OD本底是無細胞培養(yǎng)基的對照組OD值。處理后細胞增殖或毒性變化表示為未處理對照的百分數。

說明：

1. 在進行培養(yǎng)或檢測反應時，為避免培養(yǎng)基蒸發(fā)體積減少，可用封口膜部分封閉培養(yǎng)板。

2. 為減少由于CCK-8試劑在槍頭上或孔壁上的殘留所帶來的誤差，可以在加樣前用培養(yǎng)基稀釋CCK-8試劑混勻后再進行加樣。

3. 本試劑盒的檢測依賴于脫氫酶的催化反應，因此當檢測體系中有還原性物質如葡萄糖、維生素C等存在時，會干擾測定。

4. 可在非96孔板進行CCK-8測定，但需要成比例加大反應體系。反應后用比色杯測定OD。

5. 用酶標儀檢測之前，要確保每個孔內沒有氣泡，否則會影響測定。

6. 加入CCK-8試劑后，培養(yǎng)時間要根據不同的細胞種類、數量和細胞狀態(tài)來確定。通常情況下，相同的培養(yǎng)時間，懸浮細胞和貼壁細胞相比，吸光度較低，可以延長培養(yǎng)時間或者增加細胞數量。此外，白細胞可能也需要較長的培養(yǎng)時間。

7. 培養(yǎng)基中含有酚紅時，可以通過扣除培養(yǎng)基背景本底的吸光度去除酚紅的影響，而不會對檢測產生影響。

參考文獻：

Maaria Iknoen, Pinchas Cohen et al. PNAS, 2003, 100: 13042-13047

Sachiko Sakon, Hiroyasu Nakano et al. The EMBO Journal, 2003, 22: 3898-3909

Akihide Takeuchi, Ken-ichi Isobe et al. Nature Genetics, 2003, 33: 172-176

Mohammed A. S. Khan, Earl R. Stadtman et al. PNAS, 2004, 101: 11560-11565

普利萊APPLYGEN常用抗體列表：

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