北京普利萊基因技術(shù)有限公司
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主營(yíng)產(chǎn)品: 科研試劑, elisa試劑盒, 染色液, 抗體試劑, 免疫學(xué)檢測(cè)服務(wù), 特殊染色服務(wù), 核酸檢測(cè)服務(wù), 生化測(cè)定服務(wù), ELISA試劑盒定制化服務(wù), 抗體定制化服務(wù), 緩沖液定制化服務(wù)
普利萊-超濾離心管-0.5ml10KD/UFC501096-Milliproe
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貨號(hào) | 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 價(jià)格(元) |
TB6241 | 超濾管離心管[0.5ml10KD/UFC501096]Milliproe | 10個(gè) | 600 |
TB6242-1 | 超濾管離心管4ml3KDUFC800396Milliproe | 10個(gè) | 800 |
TB6242-2 | 超濾管離心管4ml10KDUFC801096Milliproe | 10個(gè) | 800 |
TB6243-1 | 超濾管離心管15ml3KDUFC900396Milliproe | 5個(gè) | 600 |
TB6243-2 | 超濾管離心管15ml10KDUFC901096Milliproe | 5個(gè) | 600 |
規(guī)格:外管2ml,內(nèi)管0.5ml 10KD 10支
超濾管使用方法和注意事項(xiàng)
蛋白濃縮和換Buffer通常使用的超濾管,常用Millipore的Amicon-Ultra-15超濾管(MWCO10kD)。也有其它型號(hào)的、不同體積大小和MWCO超濾管可選,視目的蛋白的分子量與濃縮前體積、濃縮目標(biāo)體積而定。以下是個(gè)人總結(jié)的使用方法和注意事項(xiàng)。
1、選擇合適的超濾管,主要考慮MWCO和濃縮體積,最常見的是Ultra-15(10kD)。到底選擇多大截留分子量比較合適呢?10kDa、 5kDa、還是30kDa?通常應(yīng)截留分子量不應(yīng)大于目的蛋白分子量的1/3,比如目的蛋白分子量為35kDa,就可以選擇10kDa截留分子量的超濾 管。若目的蛋白分子量為10kD左右,則可以用截留分子量3kD的超濾管。認(rèn)真閱讀使用說明書,注意超濾膜對(duì)各種化學(xué)物質(zhì)的耐受程度有所不同。
2、新買來的超濾是干燥的,使用前加入MilliQ水,水量完全過膜,冰浴或冰箱里預(yù)冷幾分鐘。然后將水倒出,即可加入蛋白液,加入的多少,以不超過管頂?shù)陌拙€為準(zhǔn)。操作要輕,加入蛋白液前,超濾管需要插在冰上預(yù)冷。
3、平衡。質(zhì)量和重心二者都要達(dá)到平衡。注意轉(zhuǎn)速和加速度不可太快,否則直接損壞超濾膜。開始離心超濾(離心機(jī)預(yù)冷至4度)。不同離心機(jī)的轉(zhuǎn)速 rpm換算成g之后,有所不同。具體可參閱附件里的說明書。離心機(jī)的加速度調(diào)至最低檔,減小對(duì)膜的壓力。注意,一定要等離心機(jī)達(dá)到目的轉(zhuǎn)速之后,方可離開離心機(jī),否則離心機(jī)出問題時(shí),無法第一時(shí)間處理,后果不可預(yù)測(cè)!膜與轉(zhuǎn)軸的方向根據(jù)說明書調(diào)整(角轉(zhuǎn)離心機(jī)的情況是膜與軸垂直)。在實(shí)際使用中,一般轉(zhuǎn)速開的比說明書里的要低,這樣可以延長(zhǎng)離心管的使用壽命。
4、當(dāng)濃縮到剩下1ml時(shí),【取50ul國(guó)產(chǎn)Bradford溶液,加入10ul流穿,看有沒變藍(lán)色,以此判斷超濾管是否漏掉蛋白。如果管漏了,將上層和流穿重新倒入新管中開始超濾。要精確判斷是否漏管,用5mg/ml的BSA離心10min,再取流穿,跑蛋白膠或Bradford粗測(cè)】,繼續(xù)加入剩下的蛋白液濃縮(在冰上操作,防止蛋白受熱),直到所有濃縮液都加完為止。離心過程中注意是否發(fā)生蛋白沉淀,導(dǎo)致堵管。若發(fā)生沉淀,要確定沉淀的具體原因,是蛋白濃度過高還是Buffer不合適;前者可用多根超濾管同時(shí)超濾,降低濃度的辦法解決,后者的方法是換不同的Buffer,直到蛋白不發(fā)生沉淀為止。
5、前面幾步用以濃縮蛋白,如果要換Buffer,在總蛋白液濃縮至1ml左右的時(shí)候,輕輕加入新的Buffer(經(jīng)0.22um超濾膜超濾),再 濃縮至1ml左右,連續(xù)三次,最后一次的濃縮終體積根據(jù)需要的蛋白濃度而定,一般不多于500ul,也有濃縮至200ul以內(nèi)的情況。按照每次至少10倍 左右的體積濃縮算,三次達(dá)到1000倍以上,基本上可以達(dá)到換buffer的目的。
6、取出最終蛋白濃縮液的操作在冰上操作,用黃槍頭(200ul)取,輕輕順著邊緣插入槍頭,輕輕吹打、混勻蛋白液,注意不要碰到超濾膜,然后吸取濃縮液,每次吸接近200ul,直到吸完。管底剩下的最后一點(diǎn)濃縮液不必吸取,否則難度太大,有可能損壞超濾膜。最后加入MilliQ水到超濾管中,沒過 超濾膜,防止膜失水變干。