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基本信息：
產品名稱：中性木聚糖酶/中性半纖維素酶微量法檢測試劑盒
測試方法: 微量法
規格 : 100管/48樣
貨號：GOY-01S6753
分類：糖代謝系列
測定意義：
木聚糖酶(EC 3.2.1.8)主要由微生物產生，能催化水解木聚糖，也被稱為戊聚糖酶或半纖維素酶，可分解釀造或飼料工業中的原料細胞壁以及β-葡聚糖，降低釀造中物料的粘度，促進有效物質的釋放，以及降低飼料中的非淀粉多糖，促進營養物質的吸收利用，因而廣泛的應用于釀造和飼料工業中，NEX一般分離自最適生長pH為6-8的微生物。

測定原理：

NEX在中性環境中催化木聚糖降解成還原性寡糖和單糖，在沸水浴條件下進一步與3,5-二硝基水楊酸發生顯色反應，在540nm處有特征吸收峰，反應液顏色的深淺與酶解產生的還原糖量成正比，通過測定反應液在540nm吸光值增加速率，可計算NEX活力。

自備實驗用品及儀器：

天平、低溫離心機、恒溫水浴鍋，可見分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96孔板和蒸餾水。
試劑組成和配制：
試劑一：液體×1瓶，4℃保存。
試劑二：液體×1瓶，4℃避光保存。
試劑三：液體×1瓶，4℃避光保存。
試劑四：液體×1瓶，4℃避光保存，未變成藍綠色之前均可使用。
標準品：液體×1支（EP管中），2 μmol/mL酚標準液，4℃保存。
測定步驟：
1. 分光光度計/酶標儀預熱30min，調節波長到510 nm，蒸餾水調零。
2. 試劑三置于37℃水浴中預熱30 min。
3. 空白管：取EP管，加入4μL蒸餾水，40μL試劑二，40μL試劑三，混勻后置于37℃水浴中保溫15min；加入試劑四120μL，混勻后于510nm測定吸光度，記為A空白管。
4. 標準管：取EP管，加入4μL標準品，40μL試劑二，40μL試劑三，混勻后置于37℃水浴中保溫15min；加入試劑四120μL，混勻后于510nm測定吸光度，記為A標準管。
5. 對照管：取EP管，加入4μL上清液，40μL蒸餾水，40μL試劑三，混勻后置于37℃水浴中保溫15min；加入試劑四120μL，混勻后于510nm測定吸光度，記為A測定管。
6. 測定管：取EP管，加入4μL上清液，40μL試劑二，40μL試劑三，混勻后置于37℃水浴中保溫15min；加入試劑四120μL，混勻后于510nm測定吸光度，記為A測定管。
其中標準管和空白管只需做一管，測定管和對照管每個樣均需做。
注意：空白管和標準管只需測定一次。產品僅用于科研
小鼠CX3C趨化因子/fractalkine(FKN/CX3CL1)ELISA試劑盒 ，英文名： FKN/CX3CL1 ELISA Kit

魚類白介素1α(IL-1α)ELISA檢測試劑盒FishIerleukin1α,IL-1αELISAkit 96T/48T

犬組胺(HIS)免疫試劑盒 Canine Histamine,HIS ELISA Kit

英文名稱MouseCCL1ELISAKit小鼠CCL1規格：96T/48T

冰凍切片組織細胞色素C蛋白表達熒光顯微鏡檢測試劑盒10/20次

RatE-SelectinELISA試劑盒大鼠E選擇素(E-Selectin/CD62E)ELISA試劑盒規格：96T/48T
小鼠糖皮質類固醇受體(GR)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

The formation of red blood cells of rat prolactin receptor (EPOR) ELISA Kit 大鼠紅細胞生成素受體(EPOR)ELISA試劑盒

Humaerminaldeoxynucleotidylansferase,TdTELISAKit 人末端脫氧核苷酸轉移酶(TdT)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝

Chickenverylowdensitylipoprotein,VLDLELISA試劑盒雞極低密度脂蛋白(VLDL)ELISA試劑盒規格：96T/48T

載玻片細胞TUBULIN蛋白表達熒光顯微鏡檢測試劑盒10/20次

Mouse,EPOELISAKit小鼠紅細胞生成素(EPO)ELISA試劑盒規格：96T/48T
CT-1(Human cardiotrophln 1) ELISA Kit 人心肌營養素1Multi-class antibodies規格： 48T

Anti-Phospho-p90RSK (Thr573) 0酸化絲氨酸/蘇氨酸激酶p90RSK蛋白抗體Multi-class antibodies規格： 0.1ml

Rhesus antibody Rh Hrasls3/HREV107 HRAS樣抑制因子3抗體 規格 0.2ml

ANA(Human anti-nucleolus antibody) ELISA Kit 人抗核仁抗體 96T

PDSS2 英文名稱： 抑癌蛋白DLP1抗體 0.2ml

CKLFH8 英文名稱： 趨化素樣因子超家族成員8抗體 0.2ml

Anti-Phospho-p90RSK (Thr573) 0酸化絲氨酸/蘇氨酸激酶p90RSK蛋白抗體Multi-class antibodies規格： 0.1ml
中性木聚糖酶/中性半纖維素酶微量法檢測試劑盒Anti-TNF- Alpha /FITC 熒光素標記壞死因子-α抗體IgGMulti-class antibodies規格： 0.2ml

PACAP receptor-I 腺苷酸環化酶激活肽受體(抗原)Multi-class antibodies規格： 0.5mg

兔抗人TIGAR蛋白抗體 Anti-TIGAR humen 0.1ml

SCEL 英文名稱： SCEL蛋白抗體 0.2ml

ERCC1 英文名稱： DNA切除修復蛋白1抗體 0.2ml

Rhesus antibody Rh phospho-KLF5(Ser275) 0酸化KLF5抗體 規格 0.1ml

PACAP receptor-I 腺苷酸環化酶激活肽受體(抗原)Multi-class antibodies規格： 0.5mg
操作步驟：
1. 樣品的準備：
a. 細胞樣品的準備：收集細胞，用4 ℃或冰浴預冷的PBS 或生理鹽水洗滌1-2遍。沉淀用預冷組織細胞裂解液4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動勻漿器) 。隨后勻漿液4℃離心，取上清作為待測樣品。
b. 組織樣品的準備：動物用生理鹽水(0.9% NaCl ，含有0.16mg/ml肝素鈉) 灌流清除血液后獲取組織樣品。按照每100mg加入500-1000ul組織細胞裂解液比例， 4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動勻漿器) 。隨后勻漿液4 ℃離心，取上清作為待測樣品。
d. 使用BCA蛋白濃度測定試劑盒（P1511）測定蛋白濃度。通常10-20ug蛋白的細胞或組織勻漿液樣品中SOD平均活力約1個活力單位左右(不同細胞和組織的差異會比較大，該活力范圍僅作為初步的參考) 。每種樣品準備20-100 ug蛋白量通常已經足夠用于后續檢測。
e. 根據蛋白濃度和預計的蛋白使用量，用試劑盒提供的SOD檢測緩沖液適當稀釋樣品。例如，小鼠肝臟通常需要稀釋10-100 倍。準備好的樣品如果當天測定，可以冰浴保存；如果當天不能完成測定，可以-70 ℃凍存，但建議盡量當天完成測定。
2. 試劑盒的準備工作：
a. WST-8酶工作液的配制： 參照下表，根據待檢測樣品(包括標準品) 數量，配制適量WST-8酶工作液，配制好的WST-8酶工作液4 ℃或冰浴保存，可當天使用，但建議盡量現配現用。
注意：由于酶溶液的用量較少且易沉降，必須注意在使用前先輕輕離心一下，然后適當混勻后再使用。
b. 反應啟動工作液配制：將試劑盒提供的反應啟動液 (40X) 溶解后混勻，按1μl 反應啟動液(40X) 加入39μl SOD 檢測緩沖液的比例進行稀釋，即為反應啟動工作液。4℃或冰浴保存，可當天使用，但建議盡量現配現用。
c. (可選做) SOD 標準品準備：需自備SOD標準品，用本試劑盒提供的稀釋液將SOD標準品稀釋至如下系列濃度：20U/ml，10U/ml ，5U/ml，2.5U/ml，1.25U/ml，0.625U/ml。在隨后的檢測中可以各取20微升，參考樣品進行檢測。說明：為避免稀釋后SOD酶活性的下降， SOD標準品宜現稀釋現使用；本試劑盒對于SOD的檢測并不需要SOD作為標準品，但可以使用SOD標準品作為陽性對照或作為對SOD活性定量的參考。
3. 樣品測定：
a. 參考下表使用96孔板加入各個組分，注意設置樣品孔和各種空白對照孔。
注意：加入反應啟動工作液后反應即會開始，可以在低溫操作或用排槍操作以減小各孔間因加入反應啟動工作液的時間先后差異而導致的誤差。
b. 37℃孵育30分鐘。
說明：孵育25至35分鐘檢測出來的SOD活力無顯著差異，但為保證檢測結果的一致性，推薦孵育30分鐘。
c. 450nm 測定吸光度。如無450nm 濾光片，可以使用420-480nm 的濾光片。也可以使用大于600nm 的波長作為參考波長進行雙波長測定。
4. 樣品中總SOD活力的計算：
a. 抑制百分率的計算：
參考如下計算公式計算抑制百分率：
抑制百分率＝[(A空白對照1－A空白對照2)－(A樣品－A空白對照3)] / (A空白對照1－A空白對照2) × 100%
如果沒有設置空白對照3，則可以把計算公式簡化為：
抑制百分率＝(A空白對照1－A樣品) / (A空白對照1－A空白對照2) × 100%
如果計算出來的抑制百分率小于30% 或大于70% ，則通常需要把該樣品重新測定。盡量使樣品的抑制百分率在30-70%范圍內。如果測定出來的抑制百分率偏高，則需適當稀釋樣品；如果測定出來的抑制百分率偏低，則需重新準備濃度較高的待測樣品。
b. SOD酶活力單位的定義：在上述化酶藕聯反應體系中抑制百分率為50% 時，反應體系中的SOD酶活力定義為一個酶活力單位 (unit)。注意：SOD的活力單位的定義方式有很多種，不同的活力單位需根據其定義的不同進行適當換算。