德國ibidi-μ-Slide-ibiPore-SiN:可視化的transwell細胞侵襲
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一款具有多孔氮化硅膜的μ-Slide載玻片,可用于實時觀察流動或靜態條件下的細胞侵襲、遷移以及細胞相互作用的可視化的“ transwell ”
產品特點:
* 透過薄而多孔的薄膜獲得卓越的光學性能
* 有著廣泛的應用,細胞可完全粘附到頂部-基底
* 對于不同細胞類型有多種孔徑大小可以選擇
應用:
1. 流動狀態下跨內皮細胞遷移
2. 2D或3D凝膠內細胞層的共培養和傳輸分析
3. 頂部-基底細胞極性分析
4. 頂部-基底梯度的細胞屏障模型分析
5. 細胞遷移分析(例如,用于研究腫瘤侵襲或轉移)
在μ-Slide ibiPore IV型膠原涂層3μm孔徑中人類內皮細胞的免疫熒光染色,相位對比度、DAPI(藍色)、VE鈣粘蛋白(綠色)和F肌動蛋白(紅色)的疊加圖像。
技術特點:
1.SiMPore的微孔氮化硅膜
2.中間具有多孔光學膜的跨通道結構
3.優異的光學性能,堪比蓋玻片
4.孔徑大小0.5μm,3μm,5μm,8μm供選擇
5.中間膜0.4μm(400 nm)
6.使用工作距離>0.5mm的物鏡
7.與ibidi泵系統(流體剪切力系統)完全兼容
8.下部通道中明確的剪切力和剪切速率范圍(更多詳情請參見“應用“欄中的《 AN11_Shear_stress》)
μ-Slide ibiPore SiN 工作原理
μ-Slide ibiPore SiN由插入兩個通道之間的水平多孔膜組成。上部通道是膜上方的靜態儲液池。下部通道是灌注通道,用于對附著在膜上的細胞施加限定的剪切應力。上部通道和下部通道僅通過隔膜彼此連通。
多孔膜由氮化硅(SiN)制成,這種材料具有非常高的化學和機械穩健性。400nm厚的氮化硅膜非常適合成像和顯微鏡觀察,沒有任何自發熒光或透明度問題(如玻璃)。SiN材料可以直接用于貼壁細胞培養,也可以選擇用ECM蛋白包被。
應用建議:孔徑 & 孔密度
什么是孔密度
孔密度是指膜的空隙體積分數。是孔隙的體積除以膜的總體積。下面的圖形為采用相同的放大倍數。
不同應用的建議孔徑:
Intended Use 經證實的應用:
這些應用已由ibidi研發團隊或者我們的用戶進行過試驗。
Endothelial Barrier Assays 內皮屏障分析
在膜的一側培養細胞單層。細胞可以在靜止或者流動剪切力條件下培養。
Co-Culture and Cell Barrier Assays 共培養和細胞屏障分析
在膜的兩側分別培養單層細胞。通過這種方法可以進行信號傳遞、共培養以及遷移實驗(例如,分析藥物通過上皮或內皮屏障的傳遞)。
Apical-Basal Cell Polarity Assays 頂端-基底端細胞極性分析
3D凝膠基質中的化學因子可以導向在膜另一側培養的單層細胞的極性發生。
Potential Use 潛在應用:
Trans-Membrane Migration in 2D/2D 跨膜遷移
在膜的一側培養單層細胞。可以觀察懸浮的白細胞在流動狀態下的滾動、粘附以及侵襲情況。
Cell Transport in a 3D Gel Matrix 細胞在3D凝膠基質中的傳遞
3D凝膠基質中的細胞遷移:在流動狀態下,觀察白細胞的滾動、粘附以及向3D凝膠基質中腫瘤細胞方向的遷移情況。
Application Examples 應用實例
MDCK和NIH-3T3細胞的相差顯微鏡觀察
Madin-Darby犬腎(MDCK,左)和NIH-3T3(右)細胞在μ-Slide ibiPore SiN,孔徑0.5μm的玻片中,無蛋白質包被。接種后,將細胞在靜態條件下在培養箱中保持20小時。相差顯微鏡,4倍物鏡。請注意,這張圖像中的中心多孔區域看起來更暗,因為0.5μm的孔隙無法用低分辨率物鏡分辨。
流動條件下HUVECS的相差顯微觀察
人臍靜脈上皮細胞(HUVEC)在μ-Slide ibiPore SiN中,孔徑3μm的玻片中,有纖連蛋白包被。將細胞接種并在具有ibidi泵系統/流體剪切力系統的流動條件(10達因/cm2)下在培養箱中保持12小時。固定后的相位對比顯微鏡,10倍物鏡。
流動下HUVECs F肌動蛋白細胞骨架的熒光顯微鏡觀察
人臍靜脈上皮細胞(HUVEC)在μ-Slide ibiPore SiN,孔徑5μm玻片中的免疫熒光染色,有纖連蛋白包被。將細胞接種并在具有ibidi泵系統/流體剪切力系統的流動條件(10達因/cm2)下在培養箱中保持12小時。綠色:肌動蛋白(鬼筆肽),藍色:細胞核(DAPI)。熒光顯微鏡,20倍物鏡。
選擇指南:ibidi 跨膜分析實驗解決方案
μ-Slide I Luer 3D | μ-Slide ibiPore SiN | |
玻片原理 | ||
界面原理 | 基于凝膠的 | 基于膜的 |
細胞基質 | 軟水凝膠(如膠原蛋白或基質凝膠) | 不同孔徑的硬質膜 |
顯微成像 | 受到凝膠光學的限制 | 沒有限制 |
流體應用 | 通道中明確的剪切力 | 下部通道中明確的剪切力 |
應用 |
|
|
屏障功能 | 是 | 是 |
遷移 | 是 | 是 |
細胞極化 | 是 | 是 |
剪應力 | 是 | 是 |
參考文獻:
Salvermoser, Melanie, et al. "Myosin 1f is specifically required for neutrophil migration in 3D environments during acute inflammation." Blood, The Journal of the American Society of Hematology 131.17 (2018): 1887-1898. 10.1182/blood-2017-10-811851
Rohwedder, Ina, et al. "Src family kinase-mediated vesicle trafficking is critical for neutrophil basement membrane penetration." Haematologica (2019). 10.3324/haematol.2019.225722
Non-Recommended Applications 不建議的應用
因技術原因,本產品不適用于以下應用,應避免使用.
本產品不適用于:
1.上通道灌注
2.兩個通道的灌注
3.跨膜流動
4.篩選應用