小鼠視網膜色素上皮細胞
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凍保存細胞之方法?
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ (-20 ℃30 分鐘*) → -80 ℃16~18 小時(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下, 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時, 以防止冰晶過大,造成細胞大量死亡,亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,惟存活率稍微降低一些。
參數規格:
小鼠視網膜色素上皮細胞【MouseEye:NormalRetinalPigmentEpithelialCells】
產品描述:視網膜色素上皮位于脈絡膜和光感受器細胞外節之間,是視網膜下腔和脈絡膜血管之間的離子、水、營養物質和代謝終產物通道。視網膜色素上皮參與視黃醇循環,吞噬脫落的光感受器細胞外節以維持光感受器細胞興奮性,并分泌多種生長因子,幫助維持脈絡膜血管內皮細胞和光感受器細胞的結構完整性。公司提供的小鼠視網膜色素上皮細胞,采用胰酶消化制備而來。細胞的培養采用公司產品小鼠視網膜色素上皮細胞培養試劑盒(MouseEyePrimaCell:NormalRetinalPigmentEpithelialCellsCatNo.3-4533)來優化目的細胞生長條件,以降低雜細胞(如脂肪細胞、纖維細胞等)的污染,同時質量的穩定。在公司技術部標準的操作流程下,小鼠視網膜色素上皮細胞傳5代仍可以保持原代細胞的分化狀態,進而可以用于評估體外模型系統和調節特定基因的遺傳功能。
產品名稱 | 小鼠視網膜色素上皮細胞 |
英文名稱 | MouseEye:NormalRetinalPigmentEpithelialCells |
貨號 | GOY-Y6440 |
實驗要點及說明 :
1.本方法適用于貼壁細胞培養,而不適用于懸浮細胞培養,懸浮細胞可使用滴片法;
2.所使用的蓋玻片應該為優質玻璃制造,并經過鉻酸洗液處理;
3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時動作要輕;
4.如果需要更多生長狀態一致的細胞,可以使用較大的培養皿,但不宜過大,以避免培養液的浪費和增加污染機率;
5.如果細胞貼壁生長能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
培養操作:
1)復蘇細胞:將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,加 入 4mL 培養基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,棄去上清液,補 加 1-2mL 培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培 養過夜(或將 細胞懸液加入 10cm 皿中,加入約 8ml 培養基,培養過夜)。第二天換液并 檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達 80%-90%,即可進行傳代培養。
1. 棄去培養上清,用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養瓶中,置于 37℃培 養箱中消化 1-2 分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分 變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養 瓶后加少量培養基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補加培養基,輕輕打勻后吸出,在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘,棄去上清液,補加 1-2mL 培養液后吹勻。
4. 將細胞懸液按 1:2 比例分到新的含 8ml 培養基的新皿中或者瓶中。
3)細胞凍存:待細胞生長狀態良好時,可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類;
1. 細胞凍存時,棄去培養基后,PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶,細胞變圓 脫 落后,加入 1ml 含血清的培養基終止消化,可使用血球計數板計數。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細胞,根據細胞數量加 入血 清和 DMSO,輕輕混勻,DMSO 終濃度為 10%,細胞密度不低于1x106/ml,每支凍存管凍存 1ml 細胞懸液,注意凍 存管做好標識。
3. 將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80 度冰箱,2 個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
人結腸平滑肌細胞RNAHCSMC miRNA5 μg醋酸地塞米Dexamethasone Acetate質量規格:>98%,BP,BR,可用于細胞培養
TNFRSF13C Others Mouse 小鼠 BAFFR / TNFRSF13C / CD268 人細胞裂解液 (陽性對照) 醋酸地塞米(標準品)Dexamethasone Acetate質量規格:HPLC>98%,標準品
GIST 人胃腸道間質瘤細胞甲氧芐啶Trimethoprim質量規格:>99.5%,超,BP2010,BR,可用于細胞培養
CL-0434SC-1(小鼠胚胎細胞)5×106cells/瓶×2甲氧芐啶(標準品)Trimethoprim質量規格:HPLC>98%,標準品
人少突膠質細胞西維來司鈉Sivelestat 質量規格:含量大于98.5%
中國倉鼠卵巢細胞(亞系克隆);CHO-HCV-NS5A吲哚(standard for GC,>99.5%(GC))Indole質量規格:standard for GC,>99.5%(GC)
DCLK1 Others Human 人 DCAMKL1 / DCLK1 (aa 1-705) 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) 辛酸乙酯(Standard for GC,>99%(GC))Ethyl octanoate質量規格:Standard for GC,>99%(GC)
CL-0057CCL-149(大鼠肺泡上皮細胞)5×106cells/瓶×2異辛醇(standard for GC, ≥99.5% (GC))2-Ethyl-1-hexanol質量規格:standard for GC, ≥99.5% (GC)
U266B1 [U266], 人多發性骨髓瘤細胞 骨肉瘤細胞,Saos-2細胞 CFPAC-1(胰腺癌細胞)棕櫚酸乙酯(standard for GC,≥99%(GC))Ethyl palmitate質量規格:standard for GC,≥99%(GC)
小鼠畸胎瘤細胞;P19異辛酸(Standard for GC,≥99.5%(GC))2-Ethylhexanoic acid質量規格:Standard for GC,≥99.5%(GC)
小鼠畸胎瘤細胞;P193-吲哚酸,英文名或英文縮寫:IAA,級別:超,99%,規格:100KU
Acc-3細胞,涎腺腺樣囊性癌細胞 人胃癌細胞,BSG823細胞 犬胸腺細胞;cf2Th滌蠟 Cqrqsin; Minqrcl wcx; Cqrosin; Cqrin; Purifiqd ozokqritq; 8001-72-0
tTA基因修飾的小鼠畸胎瘤細胞(B類);P19-CAG-tTA-1D3BIS-2甲叉雙酰胺, 2%溶液超級透明無色液體COLDsigma
HA Others H5N1 甲型流感 H5N1 (A/turkey/Turkey/1/2005) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 人細胞裂解液 (陽性對照) 乙二酸鈦鉀,英文名或英文縮寫:potewwium titanyl oxalate dihydrate,級別:CP,98.5%,規格:100克
人骨骼肌細胞HSkMCMEM EARLES培養基(+4℃)NA
小鼠視網膜色素上皮細胞HMy2.CIR細胞,人B母細胞 人肝癌細胞,H7402細胞 CL-0200RWPE1(人前列腺上皮細胞)5×106cells/瓶×2D-GalactoseD-(+)-葡萄糖25UACS級,99%
中國倉鼠卵巢細胞K1(亞系克隆);CHO-K11.3-環己二同,98% 1,3-Cyclohqxcnqdionq 204-0-9
LDLR Others Mouse 小鼠 LDLR / LDL Receptor 人細胞裂解液 (陽性對照) 流醋亞工 MqRCUROUS SULFcTq 7783-36-0
猴源細胞甘酰-甘酰-L-纈酸,英文名或英文縮寫:Gly-Gly-Val,級別:BR,98%,規格:1克
CD58 Others Cynomolgus 食蟹猴 LFA-3 / CD58 人細胞裂解液 (陽性對照) 13472-85-05-溴-2-甲氧基5-Bromo-2-metxoxypyridine
收到小鼠視網膜色素上皮細胞如何處理?
1、首先,觀察細胞培養瓶是否完好,培養液是否有漏液、渾濁等現象。若有,請拍照,并及時與技術支持聯系(所拍照片將作為后續服務依據)。
2、用75%酒精擦拭細胞培養瓶表面,顯微鏡下觀察細胞狀態。因運輸問題,部分貼壁細胞會有少量從瓶壁脫落;先不要打開培養瓶蓋,將細胞置于細胞培養箱內靜置培養2-4小時,以便穩定細胞狀態。
3、仔細閱讀細胞說明書,了解細胞相關信息,如貼壁特性(貼壁/懸浮)、細胞形態、所用基礎培養基、血清比例、所需細胞因子、傳代比例、換液頻率等。
4、靜置完成后,取出細胞培養瓶,鏡檢、拍照,記錄細胞狀態(所拍照片將作為后續服務依據);建議細胞傳代培養后,定期拍照、記錄細胞生長狀態。
5、貼壁細胞:若細胞生長密度超過80%,可正常傳代;若未超過80%,移除細胞培養瓶內培養基,預留5ml左右繼續培養,直至細胞密度達80%左右再進行傳代操作,瓶蓋可稍微擰松。
6、懸浮細胞:將細胞培養瓶內液體全部轉移至50ml無菌離心管內,1200rpm離心5min,離心后上清培養基可收集備用,管底細胞沉淀加入5ml培養基吹打、重懸。鏡檢時,若細胞密度超過80%,可將細胞懸液分至2個細胞培養瓶內培養,補加培養基至5ml;若細胞密度未超過80%,將細胞懸液移至原瓶繼續培養,直至細胞密度達80%左右時再進行傳代操作。
公司提供的原代細胞均來自新鮮組織,公司提供的小鼠源原代細胞均來自新鮮組織,用于培養該細胞的組織采集是根據國際標準方案進行。細胞的培養采用公司PrimaCellTM原代細胞培養試劑盒來優化目的細胞生長條件,以降低雜細胞的污染,同時質量的穩定。在公司生物技術部標準的操作流程下,原代細胞可以保持分化狀態,進而可以用于評估體外模型系統和調節特定基因的遺傳功能。