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凍保存細(xì)胞之方法？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲(chǔ)存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲(chǔ)存。*-20 ℃不可超過1 小時(shí)， 以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。產(chǎn)品僅供科研使用

參數(shù)規(guī)格：
大鼠視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞提取物【Rat Eye: Normal Retinal Pigment Epithelial Cells Derivatives】
產(chǎn)品描述：大鼠視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞提取物是從大鼠原代視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞提取的，大鼠原代視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞從正常大鼠眼組織制備。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過嚴(yán)格的QA/QC流程以確保其質(zhì)量。這些產(chǎn)品可以直接用于基因克隆，表達(dá)圖譜分析以及各種分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的研究。

實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說明 ：
1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法； 
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃制造，并經(jīng)過鉻酸洗液處理； 
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕； 
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率； 
5．如果細(xì)胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
培養(yǎng)操作:
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?/span> 細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并 檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。      
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細(xì)胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。  
3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類；
1. 細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶，細(xì)胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細(xì)胞，根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO，輕輕混勻，DMSO 終濃度為 10%，細(xì)胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存 1ml 細(xì)胞懸液，注意凍 存管做好標(biāo)識(shí)。
3. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱，2 個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。產(chǎn)品僅供科研使用
大鼠轉(zhuǎn)化生長因子β1(TGF-β1)試劑盒 Rat ansforming Growth Factor β1,TGF-β1 ELISA kit 硫酸鎂無水(分子生物學(xué)級(jí))  Magnesium sulfate anhydrous  質(zhì)量規(guī)格：>99%,分子生物學(xué)級(jí)

大鼠轉(zhuǎn)化生長因子β1受體(TGF-β1R)試劑盒 Rat ansforming Growth factor β1 receptor,TGF-β1R ELISA kit 硫酸鎂七水(分子生物學(xué)級(jí))  Magnesium sulfate, heptahydrate  質(zhì)量規(guī)格：>98%,分子生物

大鼠轉(zhuǎn)化生長因子β2(TGF-β2)試劑盒 Rat ansforming Growth factor β2,TGF-β2 ELISA kit 硫酸鋁十六水(>98%,BR)  Aluminum sulfate, hexadecahydrate  質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

大鼠轉(zhuǎn)化生長因子β2受體(TGF-β2R)試劑盒 Rat ansforming growth factor β2 receptor,TGF-β2R ELISA Kit 硫酸鋁鉀十二水(>99%,BR)  Aluminum potassium sulfate docecahydrate  質(zhì)量規(guī)格：>99%,BR

大鼠轉(zhuǎn)化生長因子β3(TGF-β3)試劑盒 Rat ansforming Growth factor β3,TGF-β3 ELISA Kit 硫酸鏈霉素滅菌溶液，30 mg/ml  Streptomycin sulfate solution, 30 mg/ml  質(zhì)量規(guī)格：Sterile滅菌溶液,30mg/ml

大鼠轉(zhuǎn)化生長因子β刺激蛋白22(TSC22)試劑盒 Rat ansforming growth factor-beta-stimulated Protein clone-22,TSC22 ELISA Kit 硫酸鏈霉素(標(biāo)準(zhǔn)品)  Streptomycin Sulphate  質(zhì)量規(guī)格：效價(jià)測定

Ratkeratinocyteaocrinefactor/Amphiregulin,KAF/ARELISAKit大鼠角化細(xì)胞因子(KAF)/雙調(diào)蛋白(AR)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T 無水乙酸鈉   acetate, anhydrate  質(zhì)量規(guī)格：>99%,分子生物學(xué)級(jí)

CDKN2A基因甲基化程度定量分析試劑盒20 低熔點(diǎn)瓊脂糖；具有低凝膠溫度的瓊脂糖  Agarose, low gelling temperature  質(zhì)量規(guī)格：BR;具有低凝膠溫度

MouseMotilin,MTLELISA試劑盒小鼠胃動(dòng)素(MTL)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T 無水二氫鉀  Potassium phosphate, monobasic, anhydrous  質(zhì)量規(guī)格：>99%,分子生物學(xué)級(jí)

小鼠破骨細(xì)胞分化因子(ODF)ELISA試劑盒 ，英文名： ODF ELISA Kit 6-芐氨基嘌呤  6-Benzylamino purine  質(zhì)量規(guī)格：>99%

小鼠白介素1β(IL-1β)ELISA檢測試劑盒MouseIerleukin1β,IL-1βELISAKit 96T/48T 水(HPLC grade)  Water  質(zhì)量規(guī)格：HPLC grade

人分泌型卷曲相關(guān)蛋白1(SFRP1)試劑盒 Human SFRP1 ELISA Kit 馬來酸,順丁烯二酸  Maleic acid  質(zhì)量規(guī)格：AR,HPLC>99%

RatKidneyinjurymolecule1,Kim-1ELISAKit大鼠腎損傷分子1(Kim-1)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T 硫酸銨  Ammonium sulfate  質(zhì)量規(guī)格：>99%,分子生物學(xué)級(jí)
大鼠視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞提取物基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP)羧甲基轉(zhuǎn)鐵蛋白(CMansferrin-zymography電泳分析試劑盒(MMP7)5 硬脂酸鋰(>98%,BR)  Lithium stearate  質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

基質(zhì)金屬蛋白酶11(MMP11)ELISA檢測試劑盒Monkeymaixmetalloproteinase11,MMP11 96T/48T 硫酸鋰一水(分子生物學(xué)級(jí))  Lithium sulfate monohydrate  質(zhì)量規(guī)格：>98%,分子生物學(xué)級(jí)

基質(zhì)金屬蛋白酶3抑制劑(NNGH)500微升 L-蘇糖酸鈣(>99%,BR)  L-Threonic acid calcium salt  質(zhì)量規(guī)格：>99%,BR

基質(zhì)金屬蛋白酶3抑制劑(NNGH)500微升 L-酪氨酸二鈉鹽(>98%,BC)  L-Tyrosine di salt hydrate  質(zhì)量規(guī)格：>98%,BC

基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑(TIMP1/2/3)逆相明膠酶譜法(reversegelatin-zymography)電泳分析試劑盒(不含標(biāo)準(zhǔn)樣)5 魯米諾鈉(>98%,BS)  Luminol,  salt  質(zhì)量規(guī)格：>98%,BS

激肽釋放酶(KALLIKREIN)活性比色法定量檢測試劑盒20 -6氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷(>98%,BR)  Magenta-Gal  質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

技術(shù)平臺(tái)操作20樣本 -6氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷(>98%,BR)  Magenta-Gal  質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

寄生蟲總RNA分離試劑盒20 檸檬酸鎂九水(>98%,BR)  Magnesium  nonahydrate  質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

甲RNA電泳上樣緩沖液(RNA酶保護(hù))10毫升 十二烷基硫酸鎂(分子生物學(xué))  Magnesium dodecyl sulfate  質(zhì)量規(guī)格：>85%,分子生物學(xué)級(jí)

甲變性RNA垂直電泳全套試劑盒10 氟化鎂(>98%,BR)  Magnesium fluoride  質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR
收到大鼠視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞提取物如何處理？
1、首先，觀察細(xì)胞培養(yǎng)瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象。若有，請(qǐng)拍照，并及時(shí)與技術(shù)支持聯(lián)系（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）。
2、用75%酒精擦拭細(xì)胞培養(yǎng)瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問題，部分貼壁細(xì)胞會(huì)有少量從瓶壁脫落；先不要打開培養(yǎng)瓶蓋，將細(xì)胞置于細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)2-4小時(shí)，以便穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
3、仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如貼壁特性（貼壁/懸浮）、細(xì)胞形態(tài)、所用基礎(chǔ)培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子、傳代比例、換液頻率等。
4、靜置完成后，取出細(xì)胞培養(yǎng)瓶，鏡檢、拍照，記錄細(xì)胞狀態(tài)（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）；建議細(xì)胞傳代培養(yǎng)后，定期拍照、記錄細(xì)胞生長狀態(tài)。
5、貼壁細(xì)胞：若細(xì)胞生長密度超過80%，可正常傳代；若未超過80%，移除細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)基，預(yù)留5ml左右繼續(xù)培養(yǎng)，直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右再進(jìn)行傳代操作，瓶蓋可稍微擰松。
6、懸浮細(xì)胞：將細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)液體全部轉(zhuǎn)移至50ml無菌離心管內(nèi)，1200rpm離心5min，離心后上清培養(yǎng)基可收集備用，管底細(xì)胞沉淀加入5ml培養(yǎng)基吹打、重懸。鏡檢時(shí)，若細(xì)胞密度超過80%，可將細(xì)胞懸液分至2個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)，補(bǔ)加培養(yǎng)基至5ml；若細(xì)胞密度未超過80%，將細(xì)胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng)，直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右時(shí)再進(jìn)行傳代操作。

總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進(jìn)行純化。生物科技提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結(jié)果等。             

cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA第一鏈，以50ul總反應(yīng)體系進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機(jī)引物以及10mg總RNA。68℃反應(yīng)10min 后終止RT反應(yīng)。利用1x RT Buffer 運(yùn)輸cDNA，1 μl cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng)。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴(yán)格的QA/QC分析，保證產(chǎn)品的質(zhì)量。     

蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mM Tris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)，離心去除組織碎片，通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。            潛在的應(yīng)用： <1>已知基因的PCR克隆；<2>mRNA選擇性剪接；<3>基因克隆與目標(biāo)測序；<4> Western and Northern Blot；<5>蛋白檢測與蛋白質(zhì)組學(xué)；<6>芯片研究與表達(dá)圖譜。